蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒
測(cè)定方法:    微量法
測(cè)定規(guī)格:    100T/96S
保存條件:   低溫避光保存
有 效 期:     6個(gè)月
注     意 :    正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義:

SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中,裂解葡萄糖苷鍵,催化葡萄糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等,合成相應(yīng)的葡萄糖基低聚糖。此外,SP還能催化氫醌合成熊果苷,具有極強(qiáng)的美白效果,在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。

測(cè)定原理:

SP能夠以磷酸為受體,催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸葡萄糖,在葡萄糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸葡萄糖,在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測(cè)定340nm吸光度增加速率,即可計(jì)算SP活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。

粗酶液提取:

1.組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液)進(jìn)行冰浴勻漿,然后10000g,4℃,離心10min,取上清待測(cè)。
2.按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);然后10000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測(cè)。