傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒
產品及特點： 
傳染性脾腎壞死病病毒(Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus，ISKNV）會引起傳染性脾腎壞死病，是以脾、腎壞死為主要病理特征的一種病毒性。病魚嘴張大，呼吸加快，食欲下降，魚體變黑，有時有抽筋樣顫動；頭部充血，口四周和眼出血；脾臟腫大、糜爛和充血，呈紫黑色；腎臟腫大、充血和潰爛；肝臟腫大，有缺血狀、土黃色或有淤血點等癥狀；常見有腹水，腸內有時充滿黃色粘稠物，膽囊腫大；鰓貧血，發白，伴有寄生蟲或感染出現出血、腐爛等現象。傳染性脾腎壞死病主要流行于我國南方淡水養殖的鱖中，具有很高的死亡率，對鱖養殖業造成很大的威脅，嚴重危害我國鱖養殖業發展，因此傳染性脾腎壞死病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發了簡單快捷的傳染性脾腎壞死病病毒染料法熒光定量 PCR 檢測試劑盒，
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據傳染性胰臟壞死病病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規格及成分：

編號	成分	規格
試劑一	5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	200 μL（橘黃蓋）
試劑二	MMLV-Taq Mix	75 μL（紅蓋）
試劑三	超純水	1 mL（亮黃蓋）
試劑四	傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液	100 μL（白蓋）
試劑五	傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL）	50 μL（黃蓋）
試劑六	使用手冊	1 份

注：為避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。 
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
傳染性胰臟壞死病病毒RT-PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 傳染性胰臟壞死病病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

成份	N+2 個 樣品管	RT-PCR 陰性對照	RT-PCR 陽性對照
5×雙酶一管式RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2μL	2μL
N+2 個制備的 RNA 樣品	各 12.5μL	--	--
超純水	--	12.5μL	--
傳染性胰臟壞死病病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液	--	--	12.5μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

4.上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

過程	溫度	時間
逆轉錄	42℃	30 min
預變性	95℃	5 min
PCR反應35個循環	95℃	30 sec
	58℃	30 sec
	72℃	20 sec
延伸	72℃	7 min

三、電泳檢測：
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。