產品詳情
簡單介紹：
本試劑盒既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化PCR產物，酶切等多種實驗需要。Buffer GN 溶液中含有 pH 指示劑，可根據顏色來判斷溶膠或 PCR 產物回收是否達到佳狀態。使用本產品可回收 100 bp-8 kb 大小的DNA片段，回收率可達 80%，該試劑盒操作簡便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序等實驗。
詳情介紹：
產品特點
本試劑盒既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化PCR產物，酶切等多種實驗需要。Buffer GN 溶液中含有 pH 指示劑，可根據顏色來判斷溶膠或 PCR 產物回收是否達到佳狀態。使用本產品可回收 100 bp-8 kb 大小的DNA片段，回收率可達 80%，該試劑盒操作簡便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測序等實驗。
它具有下列特點：
它具有下列特點：
1. 快速：步驟少，操作簡便，整個操作僅需十幾分鐘。
2. 高效：每個離心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在80%以上。
成分規格
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Buffer BL |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer GＮ |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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Spin Column With Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
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本試劑盒在室溫（15 - 25℃）、干燥條件下可穩定保存 12 個月，更長時間的保存可置于 2 - 8℃。 |
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本產品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
使用前請先在漂洗液 Buffer W2 中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標簽。
一、從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段
1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul Buffer BL，12,000 rpm離心1 min，棄收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）
2. 切膠：用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含DNA 的凝膠。
（注 意：紫外線對 DNA 片段有損壞作用，切膠要迅速，避免長時間照射，同時做好眼睛及皮膚的防護）
3. 稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠切成小塊，放入1.5 ml 塑料離心管中稱重。
（注 意：先稱一個空的 1.5 ml 離心管的重量，放入凝膠塊后再稱一次，兩次重量相減得到凝膠的重量）
4. 溶膠：加入等體積 Buffer GN，60℃水浴，每隔 2 - 3 min 上下振蕩，直到凝膠完全溶解。
（注 意：如凝膠重量為 100 mg，其體積可視為 100 ul，則加入 100 ul Buffer GN；如凝膠濃度大于2%，所用溶膠液體積加倍；對于回收<300 bp 的小片段可在凝膠完全溶解后再加入1/2 膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因為吸附柱在室溫時結合DNA的能力較強）
5. 吸附：待溶液冷卻后加入離心吸附柱中，室溫靜置 2 min，讓DNA 片段與吸附柱中的硅膠膜充分結合，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。
（注 意：如總體積超過 750 ul 可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中；為增加目的DNA片段的洗脫濃度，也可將多管溶膠液加入到同一離心吸附柱中）
6. 清洗：加入 500 ul Buffer W2，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中廢液。
（注 意：Buffer W2 按要求加入乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，如后續實驗要求純度較高，例如平末端連接或直接測序，建議 Buffer W2 加入后靜置 2-5 min 再離心，然后再清洗一次）
7. 干燥：將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續實驗）
8.回收：將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入20 - 50ul 洗脫液，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
二、從 PCR 反應液或酶切反應液中回收 DNA
1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul 平衡液BL，12,000rpm離心 1 min，棄收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）
2. 估計 PCR 反應液或酶切反應液的體積，向其中加入等體積溶液Buffer GN，充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）。
2. 估計 PCR 反應液或酶切反應液的體積，向其中加入等體積溶液Buffer GN，充分混勻（無需去除石蠟油或礦物油）。
（注 意：對于回收小于 150bp 的小片段可將溶液 Buffer GN 的體積增加到3 倍以提高回收率；溶液混勻后應呈現黃色。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色，請使用 10 ul 3M 乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調為黃色后再進行后續操作。）
3. 將上一步所得溶液加入一個吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2 min，12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。
（ 注 意：吸附柱容積為 750 ul，若樣品體積大于 750 ul 可分批加入。）
4. 加入 500 ul Buffer W2，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中廢液。（注意：如果純化的 DNA 是用于鹽敏感的實驗，例如平末端連接實驗或直接測序，建議Buffer W2加入后靜置 2-5 min 再離心，然后再清洗一次）
5. 將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會影響后續實驗）
6. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入20 - 50 ul 洗脫液，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
注意事項
1. Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩定性，消除高溫潮濕或其他bu良環境因素對吸附柱造成的影響。
2. 使用前請先檢查 Buffer BL、Buffer GN 是否出現渾濁，如有混濁現象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復澄清。
3. 溶液 Buffer GN 含有 pH 指示劑，黃色，指示 pH≤7.5。
4. 切膠時，紫外照射時間應盡量短，以免對 DNA 造成損傷。
5. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
