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產品詳情

  • 產品名稱： MagPURE磁珠法質粒小提試劑盒

  • 產品型號： 200T
  • 產品廠商：通蔚生物
  • 產品價格：3220
  • 產品庫存：145
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簡單介紹：
本試劑盒適用于磁珠法質粒 DNA 的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低pH處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被磁珠吸附。再經蛋白清-除液清洗，可將絕大多數菌體蛋白清-除干凈，然后通過清洗液的清洗可去除鹽離子及其他雜質，在低鹽、高 pH 條件下洗脫得到高純度的質粒 DNA。使用本試劑盒可從1 - 5 ml 過夜培養的菌液中純化得到高達 30 μg 的質粒 DNA，所得質粒可用于常規分子生物學實驗。
詳情介紹：


MagPURE磁珠法質粒小提試劑盒
產品及特點
本試劑盒適用于磁珠法質粒 DNA 的小量制備。菌體經堿裂解、高鹽、低pH處理，質粒可從菌體中釋放出來，并特異、高效地被磁珠吸附。再經蛋白清-除液清洗，可將絕大多數菌體蛋白清-除干凈，然后通過清洗液的清洗可去除鹽離子及其他雜質，在低鹽、高 pH 條件下洗脫得到高純度的質粒 DNA。使用本試劑盒可從1 - 5 ml 過夜培養的菌液中純化得到高達 30 μg 的質粒 DNA，所得質粒可用于常規分子生物學實驗。

它具有下列特點：
1. 快捷、高效：操作簡便，得率高，節約時間；
2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈；
3. 磁珠法操作，可用于自動化提取。


成分規格

Buffer S1

15ml

30ml

60ml

Buffer S2

15ml

30ml

60ml

Buffer S4

20ml

40ml

80ml

Buffer EB

10ml

10ml

30ml

Buffer W1（concentrate）

13ml

26ml

52ml

Buffer W2（concentrate）

15ml

30ml

60ml

RNase A (10 mg/ml)

150μl

300μl

600μl

Magnetic Bead

1ml

2×1ml

4×1ml

注意：使用前將全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1 中混合均勻，2 - 8℃保存;按要求在 Buffer W2   中加入無水乙醇

本產品僅供科研使用，不得用于其它用途

保存條件
在室溫(15 - 25℃)干燥條件下，可保存 12 個月；更長時間的保存可置于2 - 8℃。加入 RNase A 后的 Buffer S1 應置于 2 - 8℃保存，可穩定保存6 個月。

使用方法
1. 取 1 - 5 ml 過夜培養的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，盡量將上清去除干凈。（注 意：根據菌液的濃度決定取液量，濃度高時取 1.5 ml 菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）
2. 加入 250 μl Buffer S1，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻。
（注 意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）
3. 加入 250 μl Buffer S2，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠。
（注 意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過5 min，以免質粒受到破壞）
4. 加入 350 μl Buffer S4，立即顛倒混勻 6-8 次，12,000 rpm 離心5-10 min，小心將上清液轉移到一干凈的離心管中。
（注 意：Buffer S4 加入后應立即混合，避免產生局部沉淀；離心后如上清還有漂浮物可延長離心時間）
5. 加入 0.5 倍異丙醇混勻，然后再加入 20 μl Magnetic Bead（磁珠），震蕩混勻5min。（注 意：吸取磁珠時一定要混勻后再取）
6. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min，磁珠完全吸附后，吸去液體。
7. 將離心管從磁力架上取下，加 500 μl Buffer W1，旋渦充分混勻30 s。
（注 意：Buffer W1 在使用前按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防乙醇揮發）

8. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min，磁珠完全吸附后，吸去液體。

9. 將離心管從磁力架上取下，加 600 μl Buffer W2，旋渦充分混勻30 s。
（注 意：Buffer W2 在使用前按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防乙醇揮發）
10. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min，磁珠完全吸附后，吸去液體。
11. 重復步驟 7 和 8 一次。
12. 將離心管置于磁力架上，開蓋室溫放置 5-10min。（注意：乙醇殘留會抑制后續的酶反應，所以晾干時要確保乙醇揮發干凈。但也不要干燥過度，以免DNA 難以洗脫）
13. 將離心管從磁力架上取下，加入 50 - 100 μl Buffer EB，充分震蕩1-2 min。
14. 將離心管置于磁力架上靜置 1 min，磁珠完全吸附后，小心將溶液轉移至新的離心管中，并于適當條件保存。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調整其pH值在 7.0 - 8.5 之間）

低拷貝或大質粒（>10 kb）提取
如果所提質粒為低拷貝質粒或大于10 kb 的大質粒，應加大菌體使用量，使用5- 10ml過夜培養物，同時按照比例增加 Buffer S1、S2、S3 的用量，洗脫液Buffer EB應在60℃水浴預熱，在吸附和洗脫時可以適當延長時間，以增加提取效率。其它步驟相同。


注意事項
1. xi菌培養時間一般為 12 - 16 小時，如接種量大則應減少培養時間，過度培養會降低質 粒質量甚至導致質粒 DNA 突變。
2. 每次使用時都要注意 Buffer S2 和 S4 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。
3. 注意溶液 S1，S2 和 S4 的用量比例，若xi菌量增大，需按比例放大這些溶液的使用量。
4. 質粒的產量跟xi菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關。

MagPURE磁珠法質粒小提試劑盒
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