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ELISA實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)抗原的方法
日期：2024-12-22 16:54
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摘要：1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對(duì)至少2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個(gè)抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原有很多，比較常見(jiàn)有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測(cè)進(jìn)程也簡(jiǎn)略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說(shuō)來(lái)是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測(cè)樣品，若...
1、ELISA試劑盒雙抗體夾心法
針對(duì)至少2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個(gè)抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原有很多，比較常見(jiàn)有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測(cè)進(jìn)程也簡(jiǎn)略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說(shuō)來(lái)是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測(cè)樣品，若其中含有待測(cè)抗原就會(huì)與固相抗體結(jié)合，洗掉雜質(zhì)后，再參加酶符號(hào)的檢測(cè)抗體進(jìn)行反響，洗掉多于的酶標(biāo)抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測(cè)抗原是否存在以及相對(duì)含量。
（2）假如檢測(cè)的樣本是血清，就要留意風(fēng)濕病患者體內(nèi)內(nèi)風(fēng)濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結(jié)合固相抗體和檢測(cè)抗體，形成假陽(yáng)性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測(cè)到的含量會(huì)比實(shí)踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測(cè)樣品與酶標(biāo)檢測(cè)抗體一起參加固相載體，在酶標(biāo)檢測(cè)抗體高于樣品中的待測(cè)抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書(shū)本叫鉤狀效應(yīng)。
2、ELISA試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法
針對(duì)小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對(duì)雙抗夾心法這種強(qiáng)悍的策略，競(jìng)爭(zhēng)法完全沒(méi)有優(yōu)勢(shì)，所以競(jìng)爭(zhēng)法只在檢測(cè)小分子這個(gè)邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測(cè)進(jìn)程與雙抗夾心法更簡(jiǎn)略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進(jìn)程，可是規(guī)劃上復(fù)雜一些，首要將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標(biāo)檢測(cè)抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號(hào)抗原，兩組顏色差便是待測(cè)抗原的含量。
關(guān)于競(jìng)爭(zhēng)法也需求留意一點(diǎn)，酶符號(hào)抗原和待測(cè)樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會(huì)形成不公平競(jìng)爭(zhēng)，檢測(cè)呈現(xiàn)誤差。
針對(duì)至少2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原。首要介紹一下抗原決議簇，抗原決議簇便是決議抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)，也叫抗原表位，理論上一個(gè)抗原決議簇能誘導(dǎo)產(chǎn)生一種單克隆抗體。由6－12氨基酸或碳水基團(tuán)組成，它可以是由接連序列（線性表位）組成或由不接連的蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象表位）組成。臨床上具有2個(gè)抗原決議簇的多價(jià)抗原有很多，比較常見(jiàn)有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。檢測(cè)進(jìn)程也簡(jiǎn)略，便是包被、洗刷、加樣、洗刷、加樣、洗刷、顯色。具體說(shuō)來(lái)是先將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，再參加待測(cè)樣品，若其中含有待測(cè)抗原就會(huì)與固相抗體結(jié)合，洗掉雜質(zhì)后，再參加酶符號(hào)的檢測(cè)抗體進(jìn)行反響，洗掉多于的酶標(biāo)抗體后，參加底物顯色，顯色與否以及顏色的深淺就代表了待測(cè)抗原是否存在以及相對(duì)含量。
關(guān)于雙抗體夾心法檢測(cè)大分子抗原要留意幾點(diǎn)：
（1）固相抗體和酶標(biāo)檢測(cè)抗體一定是別離針對(duì)待測(cè)抗原的兩個(gè)不同抗原決議簇，否則兩個(gè)抗體就會(huì)為爭(zhēng)同一個(gè)決議簇而打架，會(huì)呈現(xiàn)假陰性的不佳成果。（2）假如檢測(cè)的樣本是血清，就要留意風(fēng)濕病患者體內(nèi)內(nèi)風(fēng)濕因子RF這種奇葩異種抗體的存在，它可以結(jié)合固相抗體和檢測(cè)抗體，形成假陽(yáng)性的不佳成果。
（3）包被的固相抗體含量一定是高于樣品中的抗原含量，否則檢測(cè)到的含量會(huì)比實(shí)踐含量低。
（4）假如想優(yōu)異省事一些，將待測(cè)樣品與酶標(biāo)檢測(cè)抗體一起參加固相載體，在酶標(biāo)檢測(cè)抗體高于樣品中的待測(cè)抗原的情況下呈現(xiàn)假陰性成果，這種現(xiàn)象書(shū)本叫鉤狀效應(yīng)。
2、ELISA試劑盒競(jìng)爭(zhēng)法
針對(duì)小分子抗原。這種辦法也可以用于大分子抗原，僅僅相對(duì)雙抗夾心法這種強(qiáng)悍的策略，競(jìng)爭(zhēng)法完全沒(méi)有優(yōu)勢(shì)，所以競(jìng)爭(zhēng)法只在檢測(cè)小分子這個(gè)邊際地帶發(fā)揮余熱了。臨床上首要用于T3、T4、孕酮等激su以及藥wu等。檢測(cè)進(jìn)程與雙抗夾心法更簡(jiǎn)略，包被、洗刷、加樣、洗刷、顯色，少了一步加樣的進(jìn)程，可是規(guī)劃上復(fù)雜一些，首要將純化的相應(yīng)抗體包被在固相載體上，然后每組樣本需求分兩組，一組一起參加事前混勻好的酶標(biāo)檢測(cè)抗原和樣本的混合物，一組只參加酶符號(hào)抗原，兩組顏色差便是待測(cè)抗原的含量。
關(guān)于競(jìng)爭(zhēng)法也需求留意一點(diǎn)，酶符號(hào)抗原和待測(cè)樣本一定要事前混勻好，然后一起參加固相載體，否則會(huì)形成不公平競(jìng)爭(zhēng)，檢測(cè)呈現(xiàn)誤差。