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間接法操作elisa試劑盒
日期:2024-12-22 23:30
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摘要:
間接法可用于檢測未知抗體的elisa試劑盒
elisa試劑盒步驟如下:
1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;elisa試劑盒
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標di二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌; zui后一遍用DDW洗滌。
6.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
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間接法可用于檢測未知抗體的elisa試劑盒
elisa試劑盒步驟如下:
1.首先用包被緩沖液將已知抗原稀釋到1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜;
2.次日洗滌3次;
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌;elisa試劑盒
4.(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標di二抗體(抗抗體)0.1ml;
5.37℃孵育30-60分鐘,洗滌; zui后一遍用DDW洗滌。
6.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
7.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
8.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測OD值:在elisa試劑盒檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
操作以上步驟完畢后,就可以知道結果了。