文章詳情
ELISA試劑盒反應五要素
日期：2024-12-22 22:45
瀏覽次數：294
摘要：ELISA試劑盒反應五要素有哪些？？
ELISA試劑盒反應五要素有哪些？
①引物的特異性：引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③避免引物內部出現二級結構，ELISA試劑盒避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產生非特異的擴增條帶。
④引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數第er個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， ELISA試劑盒被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
