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原代培養及其操作步驟
日期：2024-12-22 11:02
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摘要：原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環境，在無菌、適當溫度和一定的營養條件下，生存、生長和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。
原代分離細胞培養是指從供體內取出組織后，經機械以及消化分離成單個細胞或單一型細胞群，使之在體外模擬人體生理環境，在無菌、適當溫度和一定的營養條件下，生存、生長和繁殖。原代培養細胞常有不同的細胞成分，生長緩慢，但是更能代表所來源的組織細胞類型和表達組織的特異性特征。
操作步驟如下
1、剪切組織：先將所取得的組織，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手術鑷去除黏附的結締組織等非培養所需組織。再次清洗后，用手術刀將組織切成若干小塊，移入青霉素小瓶或小燒杯中，加入適量緩沖液，用彎頭眼科剪，反復剪切組織，直到組織成糊狀，約1mm3大小。靜置片刻后，用吸管吸去上層液體，加入適當的緩沖液再清洗一次。
2、消化分離：消化分離的目的是將細小的組織塊消化分離成細胞團或分散的單個細胞，以利于進一步的培養，常用的消化酶有胰蛋白酶和膠原酶。
3、培養：細胞懸液用計數板進行細胞計數。用培養液將細胞數調整為（2～5）×105 cells／ml，或實驗所需密度，分裝于培養瓶中，使細胞懸液的量以覆蓋后略高于培養瓶底部為宜。置CO2培養箱內，5％CO2，37℃靜置培養。一般3～5d，原代培養細胞可以黏附于瓶壁，并伸展開始生長，可補加原培養液量1／2的新培養液，繼續培養2～3d后換液，一般7～14d可以長滿瓶壁，進行傳代。