流式細胞術是一種基于檢測設備-流式細胞儀，對懸浮的單個活細胞或顆粒進行快速、多參數檢測分析的一項生物學前沿技術。自20世紀120年代期發展起來，已在生物醫學領域得到了廣泛的應用，免疫相關的科研實驗室流式檢測已成為不可或缺的研究手段，而的流式則成為了自基因診斷技術以來又一嶄新的高技術檢測方法。
那么為了得到一個真實可靠、準確靈敏的實驗結果，都有哪些必然的要素呢？我們把這些影響大的因素歸納為流式細胞術實驗的三大要素，分別為：流式試劑的搭配、檢測樣本的制備、流式儀器的應用。今天帶大家來認識下這三位流式界的好朋友。
熒光標記抗體的搭配
在流式細胞術的免疫分型檢測中，有各種熒光素偶聯的抗體需要進行選擇，特別是對于多色實驗來說，對熒光素的選擇搭配有著很高的要求，搭配效果直接影響到檢測效果，那么我們根據什么來進行選擇呢？
首要硬性條件-流式細胞儀的配置，流式細胞儀的激光器和濾光片配置決定了我們可以選擇的偶聯熒光標記的種類與數目。
目標蛋白條件-染料的亮度與抗原表達量相適應，目標蛋白的表達水平或豐度決定了熒光素的搭配。低表達的抗原，推薦搭配高亮度熒光素；高表達的抗原，推薦搭配低亮度熒光素。
熒光素條件-熒光素之間的光譜重疊小化，我們需要盡量選擇光譜重疊小的熒光素組合，光譜重疊嚴重的熒光素同時檢測會導致熒光溢漏，干擾檢測結果，需調節補償才能進行準確分析；還可優先選擇不同激光激發的熒光素組合，如FITC搭配APC、PE搭配APC。
檢測樣本的制備
對于流式細胞分析而言，制備的樣本質量的高低對終的檢測結果有很大的影響。如在免疫學和血液學中我們常遇到的以下樣本：外周血、骨髓、各類體液(如腦脊液、胸水、腹水)以及人體的組織(如**結、脾、肝等)，這些樣本的不同處理制備和保存方法極為關鍵。如何進行保存更制備會更有利于流式檢測呢？
為大家解惑嘍！
外周血/骨髓-樣本制備與保存：采用抗凝采血管，一般采用肝素納或EDTA抗凝采血管，12h內檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，若需保存一周以這則建議使用**細胞分離液分離出PBMC進行凍存，待需要時再復蘇檢測。
體液(如腦脊液、胸水、腹水)-樣本制備與保存：采用肝素鈉抗凝管采集，收集需要對樣本進行離心，并加入適量的stainingbuffer進行洗滌、重懸，12h內檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，如有細小沉淀，這機前建議采用300目尼龍網過濾再進行檢測。
組織(如**結、脾臟、肝臟)-樣本制備與保存：切取新鮮組織樣本置于生理鹽水或PBS中，采用機械法、酶處理法等方式將細胞輕柔的處理成單細胞懸液，盡量減少細胞損傷，12h內檢測建議室溫保存，24h-49h處理則建議4℃保存，這機前建議采用300目尼龍網過濾再進行檢測。過程中不要用甲醛、乙醇、表面活性劑等直接處理組織或單細胞樣本哦，咱得根據不同的實驗目的，具體問題具體解決滴！
檢測儀器的選擇
用于流式細胞術的儀器在過去的幾十年里不斷“進化”著，以滿足越來越多的科研與應用需求，細胞群可以根據其熒光或散射光的特性進行分析或分選。以下是市面這常見的幾款流式細胞儀-分析儀、分選儀：
市面這如此多種型號的流式細胞儀，但其基本結構大同小異，我們主要圍繞流式分析儀來展開講解，分析型的流式細胞儀主要由液流系統、光路系統、檢測分析系統來組成。
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