磷酸丙糖異構酶(TPI)測試盒

測定方法:    微量法
測定規格:   100T/96S
保存條件:    低溫避光保存
有 效 期:     6個月
注   意 :      正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義:
植物葉綠體中磷酸丙糖異構酶是光合作用中參與calvin循環的重要酶。作用于磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮之間的轉化,磷酸二羥丙酮能快速透過葉綠體的包膜進入細胞質,并在其中逐步轉化為蔗糖。

測定原理:
磷酸丙糖異構酶將磷酸二羥丙酮轉化為3-磷酸甘油醛,3-磷酸甘油醛與NAD在3-磷酸甘油醛脫氫酶的作用下生成3-磷酸甘油酸和NADH,340nm處的吸光度變化反映了磷酸丙糖異構酶的活性的高低。

自備實驗用品及儀器:
天平、低溫離心機、研缽、震蕩儀、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板。

酶液提取
①總TPI酶提取:建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體TPI酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿TPI酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中TPI酶活性。
建議測定總TPI酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的TPI,則按照步驟②提取粗酶液。