6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒
測定方法: 微量法
測定規(guī)格: 50管/48樣
保存條件: 低溫避光保存
注 意: 正式測定之前選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
磷酸戊糖途徑途徑中6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)和6PGDH依次催化NADPH合成,與能量的平衡、生長速率和細(xì)胞活力等密切相關(guān)。此外,6PGDH逆境生理中具有重要作用。
測定原理:
6PGDH催化6-磷酸葡萄糖酸和NADP+生成NADPH,NADPH在340 nm有特征吸收峰,而NADP+沒有;通過測定340nm吸光度增加速率,計(jì)算6PGDH活性。
自備儀器和用品:
低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、酶標(biāo)儀、96孔板和蒸餾水。
粗酶液提取:
1、細(xì)胞或組織樣品的制備:
培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
2、血清(漿)樣品:直接檢測。
測定操作:
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,調(diào)節(jié)波長到340 nm。
2將試劑二和試劑三轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解;在37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴10min以上;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
3. 取96孔板,依次加入10μL樣本190μL試劑一,于340nm處測定3min內(nèi)吸光值變化,第10 s吸光值記為A1,第190s吸光值記為A2。△A=A2-A1
注意:空白管只需要做一次。