產品及特點：
人類內源性逆轉錄病毒（HERV）是存在于人類細胞 DNA 內并傳給子細胞的病毒，是幾百萬年前整合到人類基因組中的逆轉錄病毒的殘余物，約占了整個基因組的 8%。大部分 HERV 元件在進化過程中由于突變、缺失等的積累，已沒有編碼能力。但仍有少數由于正性選擇的壓力，完整的開放閱讀框被保留了下來。HERV 家族可以分為三大類，γ逆轉錄病毒相關元件、β逆轉錄病毒相關元件、泡沫逆轉錄病毒相關元件。其中 W 家族屬于γ逆轉錄病毒相關元件，分布于人類基因組的多條染色體上，這一類家族的活化主要與自身免疫性以及神經系統相關。本產品是根據 PCR 原理開發的人類內源性逆轉錄病毒 W 家族檢測的試劑盒。
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據人類內源性逆轉錄病毒W家族的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規格及成分：
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編號 |
成分 |
規格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋) |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
人類內源性逆轉錄病毒W家族 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
人類內源性逆轉錄病毒W家族 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 人類內源性逆轉錄病毒W家族 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容。可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
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成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
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5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
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人人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
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N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
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超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
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人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
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MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
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預變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。