產品及特點：
猴免疫缺陷病毒（Simian Immunodeficiency Virus，SIV）是一種 RNA病毒，SIV 對其天然宿主的感染在很多情況下不具有致病性。對白頂白眉猴的廣泛研究已經證實，即使 SIVsmm 病毒感染了這種動物且循環病毒量很高，也不會使它們染上任何。然而，如果該病毒感染了亞洲或印度普通獼猴，則將會在感染后期發展成猴艾滋?。⊿AIDS）。因此猴免疫缺陷病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用本產品是根據 PCR原理開發的猴免疫缺陷病毒檢測的試劑盒。
1. 一站式，用戶不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。
2. 根據猴免疫缺陷病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。
規格及成分：
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編號 |
成分 |
規格 |
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試劑一 |
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL（橘黃蓋） |
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試劑二 |
MMLV-Taq Mix |
75 μL（紅蓋） |
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試劑三 |
超純水 |
1 mL（亮黃蓋） |
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試劑四 |
猴免疫缺陷病毒 RT-PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑五 |
猴免疫缺陷病毒 RT-PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑六 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。
自備試劑：
樣品 RNA。
猴免疫缺陷病毒RT-PCR試劑盒
使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：
1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 猴免疫缺陷病毒 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ铡Ｖ苽渌贸蔀闃悠?RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容?？梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系)：
3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：
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成份 |
N+2 個 樣品管 |
RT-PCR 陰性對照 |
RT-PCR 陽性對照 |
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5×雙酶一管式RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
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猴免疫缺陷病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各 2 μL |
2μL |
2μL |
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N+2 個制備的 RNA 樣品 |
各 12.5μL |
-- |
-- |
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超純水 |
-- |
12.5μL |
-- |
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猴免疫缺陷病毒 RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液 |
-- |
-- |
12.5μL |
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MMLV-Taq Mix |
1.5 μL |
1.5 μL |
1.5 μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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逆轉錄 |
42℃ |
30 min |
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預變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應35個循環 |
95℃ |
30 sec |
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58℃ |
30 sec |
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72℃ |
20 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現，才有必要分析樣品的實驗結果，如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。