細胞名稱

人小細胞肺癌 ; NCI-H2227

細胞品牌

通蔚生物

細胞規格

1×10?cells/T25培養瓶

細胞英文

H2227 ; H-2227 ; NCIH2227

基本形態

聚團懸浮

傳代方法

1 : 2傳代

培養條件

氣相：空氣，95%；CO2,5% ；溫度：37℃

生長特性

懸浮生長

凍存條件

無血清細胞凍存液

完全培養基

NCI-H2227完全培養基       

培養環境

37℃，5%CO2，95%AIR

供應范圍

僅供科研使用

特征特性

該細胞是1989年8月從一名54歲白人男性小細胞肺癌皮膚轉移灶中分離得到的

注意事項

懸浮細胞離心收集 , 貼壁細胞消化處理

到貨處理

1、收到細胞后，檢查外包裝情況和箱內是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發等問題，請即時聯系。

2、將細胞取出轉移至液氮或－80 度冰箱保存，建議盡早復蘇。

3、復蘇一管如有活性狀態問題及時與我們聯系，會有技術人員與您溝通指導后再復蘇二管。
特別說明：未與我方聯系擅自復蘇二管出現問題不予售后。

細胞復蘇

1、從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁。

2、將凍存管中的細胞移至含 5ml 完全培養基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養基重懸，接種 T25 培養瓶，于 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

4、隔天，換用新鮮完全培養基繼續培養。

細胞傳代

1、方法一：收集細胞懸液，至離心管中 1000rpm 離心 5min，棄上清，加 1-2mL 完全培養基重懸，按 1 ：2 的比例進行分瓶傳代，補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2細胞培養箱中培養。

2、方法二：可選用半換液方式，將 T25 瓶子豎起來，輕輕拍打兩下，在培養箱靜置 10 分鐘，肉眼可見大部分細胞沉在底部，輕輕吸去半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按 1：2 比例分瓶，補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。

細胞凍存

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的 80%面積時，棄 T25 培養瓶中的培養液，用 PBS 清洗細胞一次。

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min。

3、棄上清，沉淀細胞加入 1ml/支的無血清凍存液，混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）

4、將凍存細胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細胞轉入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。

T25細胞到貨處理

觀察

1、收到細胞后，請及時核對培養瓶上標注的細胞名稱是否與訂購的細胞名稱一致以及培養瓶是否有破損或漏液等異常情況。

處理

1、75%酒精棉球擦拭 T25 細胞培養瓶外部。
2、顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40x,100x,200x 各一張）前三天照片為重要售后依據，不提供照片默認收到狀態良好。

3、不要打開培養瓶蓋，將細胞放入 37 度培養箱中靜置 3-4 小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

4、收到細胞后，及時查看說明書是貼壁細胞還是懸浮細胞形態，并按常規貼壁或懸浮細胞的傳代方法操作。

懸浮

1、將 T25 培養瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清（后期對比培養使用），加 1-2ml 完全培養基重懸，按 1:2 比例進行分瓶傳代（兩個 T25），補充新的完全培養基至 5-8ml/瓶，放入 37℃,5%CO2 細胞培養箱中培養。（傳代時建議一瓶用原瓶里面的完全培養基，另外一瓶用自己配的完全培養基，進行對比培養。）
（注意：如收到密封培養瓶，處理完后放入培養箱培養時要將培養瓶蓋子擰松)

細胞予重發

1. 細胞運輸中遭遇的各種問題，細胞丟失瓶身破損、培養液嚴重漏液等，重發。

2. 收到細胞未開封，如出現污染狀況，重發。

3. 收到細胞3天內，發現污染問題，經核實后，重發。

4. 常溫發貨細胞靜置2小時后，干冰凍存發貨細胞復蘇2天后，絕大多數細胞未存活，經核實后，重發。

5. 常溫發貨的細胞靜置22小時且未開封或干冰凍存發貨的細胞復蘇2天后，出現污染經核實后，重發。

6. 細胞活性問題在收到產品3天內提出真實實驗結果，用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，經核實后，重發。

細胞不予重發

1. 客戶操作造成細胞污染，不重發。

2. 客戶嚴重操作失誤致細胞狀態不好，不重發。

3. 非我們推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發。

4. 細胞狀態不好，未提供真實清晰的培養前3天的細胞狀態照片，不重發。

5. 細胞培養時經其它處理導致細胞出現問題的，不重發。

6. 收到細胞發現問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發。