產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
DNA片段凝膠回收試劑盒本試劑盒適用于從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段。含有目的片段的凝膠溶于溶膠液中，通過(guò)離心吸附柱時(shí) DNA 片段可特異地結(jié)合到吸附柱的硅膠膜上，通過(guò)清洗液的清洗可去除雜質(zhì)，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，得到純度較高的DNA 片段。該試劑盒操作簡(jiǎn)便，質(zhì)量穩(wěn)定，得率高，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測(cè)序、PCR模板等后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本試劑盒適用于從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段。含有目的片段的凝膠溶于溶膠液中，通過(guò)離心吸附柱時(shí) DNA 片段可特異地結(jié)合到吸附柱的硅膠膜上，通過(guò)清洗液的清洗可去除雜質(zhì)，在低鹽、高 pH 條件下洗脫，得到純度較高的DNA 片段。該試劑盒操作簡(jiǎn)便，質(zhì)量穩(wěn)定，得率高，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測(cè)序、PCR模板等后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 快速：步驟少，操作簡(jiǎn)便，整個(gè)操作僅需十幾分鐘；
2. 高效：每個(gè)離心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在80%以上。
成分規(guī)格
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Buffer BL |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer GS |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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Spin Columnwith Collection Tubes |
50個(gè) |
100個(gè) |
200個(gè) |
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本試劑盒在室溫（15 - 25℃）、干燥條件下可穩(wěn)定保存 12 個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2 - 8℃。 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 μl 的平衡液 BL，12,000 rpm(-13,400×g) 離心 1 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）
1. 切膠。用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含DNA 的凝膠。（注意：紫外線對(duì) DNA 片段有損壞作用，切膠要迅速，避免長(zhǎng)時(shí)間照射，同時(shí)做好眼睛及皮膚的防護(hù)）2. 稱重。將切下的含有目的 DNA條帶的凝膠切成小塊，放入1.5 ml塑料離心管中，稱重。
（注 意：先稱一個(gè)空的 1.5 ml 塑料離心管的重量，然后放入凝膠塊再稱一次，兩次重量相減得到凝膠的重量）
3. 溶膠。加入等體積溶膠液 Buffer GS，60℃水浴，每隔 2 - 3 min 上下振蕩，直到凝膠完全溶解。
（注 意：如凝膠重量為 100 mg，其體積可視為 100 ul，則加入 100 ul 溶膠液；如凝膠濃度大于2%，所用溶膠液體積加倍；對(duì)于回收<300 bp 的小片段可在凝膠完全溶解后再加入1/2 膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)）
4. 吸附。待溶液冷卻后加入離心吸附柱中，室溫靜置 2 min，讓DNA 片段與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。
（注 意：如總體積超過(guò) 750 ul 可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中；為增加目的DNA片段的洗脫濃度，也可將多管溶膠液加入到同一離心吸附柱中）
5. 清洗。加入 600 ul 的清洗液 Buffer W2，12,000 rpm 離心1 min，棄收集管中廢液。（注 意：清洗液 Buffer W2 按要求加入乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā); 如后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求純度較高，可再清洗一次）
6. 干燥。將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)）
7. 回收。將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 塑料離心管中，在吸附柱中央加入20- 50μl洗脫液，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
注意事項(xiàng)
1. 如溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時(shí)間，必要時(shí)可在37℃水浴溶解，用后及時(shí)將瓶蓋蓋緊。
2. 所有操作都應(yīng)在室溫進(jìn)行，操作過(guò)程中應(yīng)注意防護(hù)，不要將溶液濺到皮膚上，眼睛里。
3. 如下一步實(shí)驗(yàn)要求較高，則應(yīng)盡量使用 TAE 電泳緩沖液，電泳時(shí)使用新的電泳緩沖液，以免影響電泳和回收效果。
4. 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì) DNA 造成損傷。
5. 如果回收率較低，可在膠充分溶解后檢測(cè) pH 值，如 pH 值大于7.5，可向含有DNA的膠溶液中加 10 - 30 μl 3 M 醋酸鈉（pH5.0）將 pH 值調(diào)到 5 - 7 之間。
6. 回收<100bp及>10 kb 的DNA片段時(shí)應(yīng)加大溶膠液的體積，延長(zhǎng)吸附和洗脫的時(shí)間。
7. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越少，回收率越低。
