產(chǎn)品詳情
簡(jiǎn)單介紹：
本試劑盒既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化PCR產(chǎn)物，酶切等多種實(shí)驗(yàn)需要。Buffer GN 溶液中含有 pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或 PCR 產(chǎn)物回收是否達(dá)到佳狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收 100 bp-8 kb 大小的DNA片段，回收率可達(dá) 80%，該試劑盒操作簡(jiǎn)便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
本試劑盒既能從 TAE 或 TBE 瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段，又能用于直接純化PCR產(chǎn)物，酶切等多種實(shí)驗(yàn)需要。Buffer GN 溶液中含有 pH 指示劑，可根據(jù)顏色來判斷溶膠或 PCR 產(chǎn)物回收是否達(dá)到佳狀態(tài)。使用本產(chǎn)品可回收 100 bp-8 kb 大小的DNA片段，回收率可達(dá) 80%，該試劑盒操作簡(jiǎn)便，得到的 DNA 片段可用于酶切、連接、測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 快速：步驟少，操作簡(jiǎn)便，整個(gè)操作僅需十幾分鐘。
2. 高效：每個(gè)離心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在80%以上。
成分規(guī)格
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Buffer BL |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer GＮ |
25ml |
50ml |
100ml |
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Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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Spin Column With Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
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本試劑盒在室溫（15 - 25℃）、干燥條件下可穩(wěn)定保存 12 個(gè)月，更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于 2 - 8℃。 |
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本產(chǎn)品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
使用前請(qǐng)先在漂洗液 Buffer W2 中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。
一、從瓊脂糖凝膠中回收 DNA 片段
1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul Buffer BL，12,000 rpm離心1 min，棄收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）
2. 切膠：用干凈刀片將目的 DNA 條帶切下，盡量切除不含DNA 的凝膠。
（注 意：紫外線對(duì) DNA 片段有損壞作用，切膠要迅速，避免長(zhǎng)時(shí)間照射，同時(shí)做好眼睛及皮膚的防護(hù)）
3. 稱重：將切下的含有目的 DNA 條帶的凝膠切成小塊，放入1.5 ml 塑料離心管中稱重。
（注 意：先稱一個(gè)空的 1.5 ml 離心管的重量，放入凝膠塊后再稱一次，兩次重量相減得到凝膠的重量）
4. 溶膠：加入等體積 Buffer GN，60℃水浴，每隔 2 - 3 min 上下振蕩，直到凝膠完全溶解。
（注 意：如凝膠重量為 100 mg，其體積可視為 100 ul，則加入 100 ul Buffer GN；如凝膠濃度大于2%，所用溶膠液體積加倍；對(duì)于回收<300 bp 的小片段可在凝膠完全溶解后再加入1/2 膠塊體積的異丙醇以提高回收率；膠塊完全溶解后將溶液溫度降至室溫再上柱，因?yàn)槲街谑覝貢r(shí)結(jié)合DNA的能力較強(qiáng)）
5. 吸附：待溶液冷卻后加入離心吸附柱中，室溫靜置 2 min，讓DNA 片段與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合，然后 12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。
（注 意：如總體積超過 750 ul 可分 2 次將溶液加入同一離心吸附柱中；為增加目的DNA片段的洗脫濃度，也可將多管溶膠液加入到同一離心吸附柱中）
6. 清洗：加入 500 ul Buffer W2，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中廢液。
（注 意：Buffer W2 按要求加入乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，如后續(xù)實(shí)驗(yàn)要求純度較高，例如平末端連接或直接測(cè)序，建議 Buffer W2 加入后靜置 2-5 min 再離心，然后再清洗一次）
7. 干燥：將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。
（注 意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)）
8.回收：將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入20 - 50ul 洗脫液，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
二、從 PCR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液中回收 DNA
1. 柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 400 ul 平衡液BL，12,000rpm離心 1 min，棄收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過的柱子）
2. 估計(jì) PCR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入等體積溶液Buffer GN，充分混勻（無(wú)需去除石蠟油或礦物油）。
2. 估計(jì) PCR 反應(yīng)液或酶切反應(yīng)液的體積，向其中加入等體積溶液Buffer GN，充分混勻（無(wú)需去除石蠟油或礦物油）。
（注 意：對(duì)于回收小于 150bp 的小片段可將溶液 Buffer GN 的體積增加到3 倍以提高回收率；溶液混勻后應(yīng)呈現(xiàn)黃色。如果溶液的顏色為桔紅色或紫色，請(qǐng)使用 10 ul 3M 乙酸鈉（pH 5.0）將溶液的顏色調(diào)為黃色后再進(jìn)行后續(xù)操作。）
3. 將上一步所得溶液加入一個(gè)吸附柱中（吸附柱放入收集管中），室溫放置2 min，12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。
（ 注 意：吸附柱容積為 750 ul，若樣品體積大于 750 ul 可分批加入。）
4. 加入 500 ul Buffer W2，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中廢液。（注意：如果純化的 DNA 是用于鹽敏感的實(shí)驗(yàn)，例如平末端連接實(shí)驗(yàn)或直接測(cè)序，建議Buffer W2加入后靜置 2-5 min 再離心，然后再清洗一次）
5. 將離心吸附柱于 12,000 rpm 離心 2 min，甩干殘留漂洗液。（注意：此步不能省略，否則殘留乙醇會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)）
6. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的 1.5 ml 離心管中，在吸附柱中央加入20 - 50 ul 洗脫液，室溫放置 2 min。12,000 rpm 離心 1 min 收集 DNA 片段。
（注 意：為增加回收效率，可將洗脫液在 60℃預(yù)熱，也可將得到的溶液重新加入到離心管中，室溫放置 2 min，再次離心收集。如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其pH 值在7.0 - 8.5 之間）
注意事項(xiàng)
1. Buffer BL 的加入能夠改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和穩(wěn)定性，消除高溫潮濕或其他bu良環(huán)境因素對(duì)吸附柱造成的影響。
2. 使用前請(qǐng)先檢查 Buffer BL、Buffer GN 是否出現(xiàn)渾濁，如有混濁現(xiàn)象，可在37℃水浴中加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清。
3. 溶液 Buffer GN 含有 pH 指示劑，黃色，指示 pH≤7.5。
4. 切膠時(shí)，紫外照射時(shí)間應(yīng)盡量短，以免對(duì) DNA 造成損傷。
5. 回收率與初始 DNA 量和洗脫體積有關(guān)，初始量越少、洗脫體積越小，回收率越低。
