產品詳情
簡單介紹：
通用型基因組DNA提取試劑盒本試劑盒適合于從新鮮或冷凍的動物組織，細胞，血液，細-菌等多種樣品中提取高純度總 DNA。本品可純化獲得分子量大為 50kb 的 DNA 片段，純化過程不需要使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀。本試劑盒采用優化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結合到硅基質離心吸附柱上，PCR 和其他酶促反應的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除，使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切，PCR，Real-Time PCR，文庫構建，Southern Blot，
詳情介紹：
產品特點
本試劑盒適合于從新鮮或冷凍的動物組織，細胞，血液，細-菌等多種樣品中提取高純度總 DNA。本品可純化獲得分子量大為 50kb 的 DNA 片段，純化過程不需要使用苯酚或氯仿等有毒溶劑，無需乙醇沉淀。本試劑盒采用優化的緩沖體系使裂解液中的DNA高效特異的結合到硅基質離心吸附柱上，PCR 和其他酶促反應的抑制劑可通過兩步洗滌步驟被有效去除，使用低鹽緩沖液或水洗脫，即可得到高純度DNA。純化得到的DNA可以直接用于酶切，PCR，Real-Time PCR，文庫構建，Southern Blot，
它具有下列特點：
它具有下列特點：
1. 簡便快速：1 小時內可獲得高純度的基因組 DNA；
2. 質量好：可直接進行 PCR、酶切和雜交等分子生物學實驗。
成分規格
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Buffer GTL |
12ml |
25ml |
50ml |
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Buffer GL |
12ml |
25ml |
50ml |
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Buffer EB |
10ml |
10ml |
30ml |
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Buffer W1（concentrate） |
13ml |
26ml |
52ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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Proteinase K |
1ml |
2×1ml |
4×1ml |
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Spin Columnwith Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
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蛋白酶K 于-20℃, 其他組分室溫（15 - 25℃) , 可保存 12 個月 |
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本產品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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使用方法
自備試劑
無水乙醇
Enzymatic Lysis Buffer（提取革蘭氏陽性菌基因組DNA時須準備）。EnzymaticLysisBuffer 配方：20 mM Tris，pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2％Triton X-100；終濃度為20mg/ml的 Lysozyme（溶菌酶）。
一、血液及細胞樣本基因組提取
1. 材料處理
1) 如果提取材料為哺乳動物抗凝血液（無核紅細胞），可直接向50-200μl 新鮮或冷凍的抗凝血液樣品中加入 Buffer GTL 補足至 200μl。
2) 如果提取材料為禽類，鳥類，兩棲類或更低級生物的抗凝血液，其紅細胞為有核細胞，取 5-10μl 新鮮或冷凍的抗凝血液樣品，加入Buffer GTL 補足至200μl。
3) 貼壁培養的細胞應先處理為細胞懸液（提取量為5x106 個細胞），2000rpm（400g）離心 5min，棄盡上清，加 200μl GTL，振蕩至樣品徹底懸浮。
（注 意：如需去除 RNA，可在上述步驟完成后，加入 4μl 濃度為 100mg/ml 的RNase A溶液，渦旋15 秒，室溫放置 2min。）
2. 加入 20μl Proteinase K 溶液,混勻。
3. 加入 200μl Buffer GL，渦旋振蕩充分混勻，56?C 水浴 10min。
4. 短暫離心以去除管蓋內壁的水珠。加入200μl 無水乙醇，渦旋振蕩充分混勻，短暫離心。
（注 意：加入 Buffer GL 和無水乙醇后要立即渦旋震蕩混勻。加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能會產生白色沉淀，不會影響后續實驗。一些組織在加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能形成溶膠狀產物，此時推薦進行劇烈震蕩或渦旋處理。）
5. 上一個步驟中所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12,000 rpm（約 13,400g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
（注 意：如需進一步提高 DNA 純度，可重復步驟 7。）
8. 12,000 rpm 離心 2min，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。（注 意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶切、PCR等酶促反應）。
9. 將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位懸空加入50-200μlBuffer EB 或滅-菌水，室溫放置 2-5min，12000rpm離心1min，收集DNA溶液，-20℃保存 DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液 Buffer EB 在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調整其pH值在7.0 - 8.5之間，為了增加回收率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2min，再次離心收集）
二、動物組織基因組提取
1. 材料處理如果提取材料為動物組織，取 25 mg（脾組織用量應少于10 mg）；如果材料為鼠尾，取一段長度為 0.4-0.6 cm 的大鼠鼠尾或兩段長度為 0.4-0.6 cm 的小鼠鼠尾。樣本進行液氮研磨或切成小塊后置于 1.5 ml 離心管中，加入 180μl Buffer GTL，將不同樣品做好標記。若使用勻漿器處理樣本，勻漿前向樣本中加入不超過 80μl Buffer GTL，勻漿后加入100μlBuffer GTL。
注 意：
1）確保各組織的量不要超出推薦范圍。
2）組織樣本在加入 Buffer GTL 之前用液氮研磨或加入 Buffer GTL 用勻漿器勻漿處理，可以增加裂解效率。）
2. 加入 20μl Proteinase K，渦旋震蕩使樣品徹底混勻。56℃水浴，直至組織完全裂解，孵育過程中可每隔一段時間顛倒或震蕩離心管使樣品分散。
注 意：
1）不同組織消化時間不同，通常 1-3 小時即可完成，鼠尾需要消化6-8 小時，必要時過夜消化，不會影響后續操作。
2）如果孵育和渦旋震蕩后仍然有膠狀物質，延長56?C 孵育時間或再加入20μl Proteinase K 消化。
3）如需去除 RNA，可在上述步驟完成后，加入4μl 的濃度為100mg/ml 的RNase A 溶液，渦旋 15 秒，室溫放置 5-10min。）
3. 加入 200μl Buffer GL，渦旋震蕩充分混勻，70?C 水浴 10min。短暫離心后加入200μl無水乙醇，渦旋震蕩充分混勻。
注 意：
1）加入 Buffer GL 和無水乙醇后要立即渦旋震蕩混勻。
2）加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能會產生白色沉淀，不會影響后續實驗。一些組織（如脾，肺）在加入 Buffer GL 和無水乙醇后可能形成溶膠狀產物，此時推薦進行劇烈震蕩或渦旋處理。）
4. 短暫離心，將步驟 3 所得溶液全部加入到已裝入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中，若一次不能加完溶液，可分多次轉入。12,000 rpm（約13,400g）離心1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
5. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心 1 min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
6. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm。離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
（注 意：如需進一步提高 DNA 純度，可重復步驟）
7. 12,000 rpm 離心 2min，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。（注 意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶切，PCR等酶促反應）。
8. 將吸附柱置于一個新的離心管（自備）中，向吸附柱的中間部位懸空加入50-200μlBuffer EB 或滅-菌水，室溫放置 2-5min，12,000 rpm離心1min，收集DNA溶液，-20℃保存 DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液 Buffer EB 在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH調整其pH值在7.0 - 8.5之間，為了增加回收率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置2min，再次離心收集）
三、細-菌基因組提取
1. 細-菌樣本預處理取 1 - 3 ml 過夜培養的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄上清。（注 意：根據菌液的濃度決定取液量，當 OD600=1 時，1ml 菌液濃度為 109 個細胞，菌液的量不要超過 109 個細胞，太多會使離心柱的膜堵塞，提取的基因組 DNA 的量減少，純度降低）
2. 加入 200μl Buffer GTL，用槍頭充分吹打或用渦旋振蕩器充分懸浮。
（注 意：對于較難破壁的革蘭氏陽性菌，可略過第 2 步驟，加入溶菌酶進行破壁處理，具體方法為：加入 180 μl 終濃度為 20 mg/ml 的溶菌酶緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0；2 mM Na2-EDTA；1.2%TritonX-100；溶菌酶必須用溶菌酶干粉溶解在緩沖液中進行配制，否則會導致溶菌酶無活性)，37 ℃處理30 min 以上。如要去除 RNA，可加入濃度為 100 mg/ml 的 RNase A 4μl，室溫處理5 min）
3. 加入 20μl Proteinase K 溶液，充分混勻。
4. 加入 200μl Buffer GL，充分混勻，56℃水浴 10 min，孵育過程中每隔一段時間顛倒或震蕩離心管使樣本分散均勻。溶液變得清亮后短暫離心，以去除管蓋內壁的水珠。（注意：Buffer GL 加入時可能會產生白色沉淀，一般 56℃時會消失，不影響后續實驗，如溶液未變清亮，說明細胞裂解不徹底，可能導致提取的 DNA 量少或者提取的 DNA 不純
5. 加入 200μl 無水乙醇，充分震蕩，此時可能會出現絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內壁水珠。
6. 將一個離心吸附柱放入收集管中，將上一步所得溶液和絮狀沉淀轉移到吸附柱中，12,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中的濾液。
7. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W1（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
8. 向吸附柱中加入 500μl Buffer W2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000rpm。離心 1min，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。（注意：如需進一步提高 DNA 純度，可重復步驟 6。）
9. 12,000 rpm 離心 2min，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數分鐘，以徹底晾干。（注 意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除，乙醇的殘留會影響后續的酶切、PCR等酶促反應）。
10. 將離心吸附柱置于一個新的 1.5 ml 塑料離心管（自備）中，加入50 - 100μl Buffer GE，室溫放置 2 min，12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即基因組DNA。
（注 意：為增加洗脫效率，可將洗脫液 Buffer EB 在 60℃預熱。如需使用去離子水洗脫，可用NaOH 調整其pH值在7.0 - 8.5 之間，為了增加回收率，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，室溫放置 2 min，再次離心收集）
注意事項
1. 如 Buffer GTL 和 Buffer GL 產生沉淀，可在 56℃水浴溶解。
2. 樣品應避免反復凍融，否則會導致提取的 DNA 片段小，提取量下降。
3. 所有離心步驟均為臺式離心機，室溫下操作。
4. 按要求在 Buffer W1 和 Buffer W2 中加入無水乙醇。
