產品詳情
簡單介紹：
SPEEDYPURE快速質粒小提中量試劑盒本試劑盒用于質粒 DNA 的小量快速制備。在經典堿裂解法提取質粒的基礎上進行改 進優化，可視化操作，可在 10 min 之內完成提取任務，大大降低了提取時間。質粒可從 菌體中快速釋放，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。所得質粒可直接用于酶切、轉化、 PCR 、實時熒光定量，測序等各種分子生物學實驗。
詳情介紹：
產品及特點
本試劑盒用于質粒 DNA 的小量快速制備。在經典堿裂解法提取質粒的基礎上進行改 進優化，可視化操作，可在 10 min 之內完成提取任務，大大降低了提取時間。質粒可從 菌體中快速釋放，并特異、高效地被離心吸附柱吸附。所得質粒可直接用于酶切、轉化、 PCR 、實時熒光定量，測序等各種分子生物學實驗。
它具有下列特點：
它具有下列特點：
1. 快捷、高效：可視化操作，簡便高效，節約時間；
2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈。
成分規格
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Buffer S1（紫紅色） |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer EB |
10ml |
30ml |
60ml |
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Buffer S2 |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer S5 |
30ml |
60ml |
120ml |
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Buffer W2（concentrate） |
15ml |
30ml |
60ml |
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RNase A (10 mg/ml) |
300μl |
600μl |
1.2ml |
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Spin Column with Collection Tubes |
50套 |
100套 |
200套 |
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注意：使用前將全部 RNase A 溶液加到 Buffer S1中混合均勻，2 - 8℃保存 ; 按要求在 Buffer W2 中加入無水乙醇 |
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本產品僅供科研使用，不得用于其它用途 |
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保存條件
在室溫(15-25℃)干燥條件下，可保存 12 個月；更長時間的保存可置于 2-8℃ 。若溶 液產生沉淀，應在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入 RNase A 后的 Buffer S1 應置于 2-8℃ 保存，可穩定保存 6 個月。
使用方法
使用方法
1. 取 5-10 ml 過夜培養的菌液，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，盡量將上清去除干凈。（注 意：根據菌液的濃度決定取液量，濃度高時取 5 ml 菌液離心即可，濃度低時可多收集一次）
2. 加入 500 μl Buffer S1，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現出均勻混濁的棕紅色。
（注 意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未徹底懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低）
3. 加入 500 μl Buffer S2，溫和顛倒混勻使菌體完全裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。
（注 意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染）
4. 加入 500 μl Buffer S5，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的沉淀物產生，繼續混勻直到完全變為黃色，然后 12,000 rpm 離心 3 min。
（注 意：Buffer S5 加入后應立即混合，避免產生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說明復性不充分，繼續混勻至溶液顏色完全變為澄清的黃色）
5. 小心將上清液轉移到離心吸附柱中，12,000 rpm 離心 0.5min，棄收集管中濾液；吸附柱的容量是 750μl，要分 2 次轉入。
6. 加入 600 μl Buffer W2，室溫 12,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液。
（注 意：Buffer W2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發）
7. 將吸附柱置于一新的無菌1.5 ml離心管（自備）中，加入100-300 μl的洗脫液Buffer EB，室溫 12,000 rpm 離心 1 min，離心管底溶液即質粒 DNA。
注意事項
1. xi菌培養時間一般為12 -16小時，如接種量大則應減少培養時間，過度培養會降低質粒質量甚至導致質粒DNA突變。
2. 每次使用時都要注意 Buffer S2 和 S5 是否形成沉淀，如有沉淀37℃溶解后再用。
3. 質粒的產量跟xi菌量、質粒拷貝數、質粒大小和操作規范程度密切相關，一般1.5 ml 過 夜培養菌體可收獲約10μg高拷貝質粒。
4. 吸附柱的吸附量為 70μl，要獲得更多的質粒請分多次提取或用質粒大提試劑盒。
