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產品詳情

  • 產品名稱： 2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)

  • 產品型號： 5×1ml
  • 產品廠商：通蔚生物
  • 產品價格：563
  • 產品庫存：102
  • 產品文檔：
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簡單介紹：
2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)本產品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 的增強劑和優化劑以及穩定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復雜模板如GC 含量高（>60%），有二級結構的擴增和大規模基因檢測。
詳情介紹：

產品特點
本產品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR 的增強劑和優化劑以及穩定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復雜模板如GC 含量高（>60%），有二級結構的擴增和大規模基因檢測。

它具有下列特點：
1. 顯著提高 PCR 的特異性和靈敏度；
2. 多次凍融或長期放于 4℃不會影響活性；
3. 快速簡便，大大降低勞動強度和取樣誤差，而且加入了高性能的PCR增強劑和優化劑，降低了對 PCR 條件的要求；
4. 分含染料和不含染料兩種體系。含染料的 MasterMix 產品在PCR結束后可以直接電泳，無需加入上樣緩沖液。

成分規格

產品名稱

規格

2×Pfu PCR MasterMix(含染料)

1ml/5×1ml

2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)

1ml/5×1ml

-20℃可長期保存，多次凍融不會影響活性。如需經常使用，可存放于 4℃。

本產品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規PCR體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優化）
1. PCR體系 
推薦反應體系(20μl)

試劑

用量

模板ＤＮＡ

＜1ug

Primer1(10μM)

0.5μl

Primer2(10μM)

0.5μl

2×Pfu PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl


（注 意：引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系）
2. PCR程序

過程

溫度

時間

預變性

94℃

2min

25－35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

60sec/kb

延伸

72℃

5min


注 意：    
A 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴增效率時，適當降低退火溫度；發生非特異性反應時，提高退火溫度，由此優化反應條件。
B 延伸時間應根據所擴增片段大小設定，Pfu DNA Polymerase 的擴增效率為1 kb/min。
C 可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少，擴增量不足；如果循環次數太多，錯配機率會增加，非特異性背景嚴重。所以，在保證產物得率的前提下，應盡量減少循環次數）
3. 結果檢測
反應結束后取5μl反應產物，加入適量上樣緩沖液（含染料的不用加），然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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