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產品詳情

  • 產品名稱：2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)

  • 產品型號： 5×1ml
  • 產品廠商：通蔚生物
  • 產品價格：276
  • 產品庫存：104
  • 產品文檔：
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簡單介紹：
2× Probe qPCR Master Mix(with ROX)本產品為2×預混熒光定量PCR反應體系，使用時只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差，根據不同熒光定量 PCR 儀選擇使用）和水，使其工作濃度為1×，即可進行反應。
詳情介紹：
產品特點
2 × Probe qPCR Master Mix 是專用于探針法實時熒光定量PCR 的預混體系，包含熱啟動 DNA Polymerase、PCR 優化的穩定劑和增強劑、dNTPs 和Mg2+，操作簡便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉錄后 cDNA 靶序列檢測，如基因表達分析，拷貝數分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針法熒光定量。本產品為2×預混熒光定量PCR反應體系，使用時只需加入模板、引物、ROX Reference Dye（用以校正孔與孔之間產生的熒光信號誤差，根據不同熒光定量 PCR 儀選擇使用）和水，使其工作濃度為1×，即可進行反應。

它具有下列特點：
1. 高靈敏度：可以精-確定量低拷貝模板；
2. 高特異性：大限度的減少引物二聚體和非特異性產物；
3. 有效性：擴增效率高，CT 值更低。

成份規格

產品組成

規格

2×Probe qPCR Master Mix

1ml / 5×1ml

50 × ROX Reference Dye I

40μl / 200μl

50 × ROX Reference Dye II

40μl / 200μl

-20℃保存一年

本產品僅供科研使用　，不得用于其它用途


使用方法
（注 意：以下舉例為常規qPCR體系和反應條件，實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的改進和優化）
1.根據以下表格配置反應體系，總體積為20 μl

試劑

用量

終濃度

2×Probe qPCR Master Mix

10μl

1×

正義引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

反義引物 (10μM)

0.5μl

0.25μM

模板 DNA

xμl

/

探針(10μM)

0.5μl

0.25μM

ddH2O

Up to 20μl

/

50× ROX Reference Dye I or II

0.4μl

1×


注 意：
1）通常引物濃度以 0.25 μM 可以得到較好結果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM 作為設定范圍的參考。
2）使用的探針濃度，與使用的熒光定量 PCR 儀、探針種類、熒光標記物質種類有關，實際使用時請參照儀器說明書，或各熒光探針的具體使用要求進行濃度的調節。
3）通常 DNA 模板的量以10-100 ng基因組 DNA或1-10 ng cDNA 為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數不同，可對模板進行梯度稀釋，以確定佳的模板使用量。
需使用 ROX Reference Dye I 的機型：
ABI Prism5700、7000、7300、7700、7900、7900HT、7900HT Fast、Step-One、Step-One Plus。
需使用 ROX Reference Dye II 的機型：
ABI Prism 7500/7500Fast、ViiA7, StratageneMX4000/MX3005P/MX3000P。
不需要使用 ROX 的機型：
Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4; Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR; Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene6000; Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler。
2. qPCR 反應程序，兩步法 PCR：

過程

溫度

時間

預變性

95℃

5min

35－40cycles

變性

95℃

15sec

 

退火／延伸

60℃

30sec

注 意：建議采用兩步法 PCR 反應程序，若因使用 Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試進行三步法 PCR 擴增，退火溫度請以 55℃ - 65℃的范圍作為設定參考）

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