產(chǎn)品詳情
簡單介紹：
2 × Probe qPCR Mix是專用于探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的預(yù)混體系，包含熱啟動(dòng)DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑、dNTPs 和 Mg2+，操作簡便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列檢測，如基因表達(dá)分析，拷貝數(shù)分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針法熒光定量。
詳情介紹：
產(chǎn)品特點(diǎn)
2 × Probe qPCR Mix 是專用于探針法實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的預(yù)混體系，包含熱啟動(dòng)DNA Polymerase、PCR 優(yōu)化的穩(wěn)定劑和增強(qiáng)劑、dNTPs 和 Mg2+，操作簡便，主要用于基因組 DNA 靶序列和 RNA 反轉(zhuǎn)錄后 cDNA 靶序列檢測，如基因表達(dá)分析，拷貝數(shù)分析，SNP 基因型分析等，適用于不同類型探針法熒光定量。
它具有下列特點(diǎn)：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 高靈敏度：可以精-確定量低拷貝模板；
2. 高特異性：限度的減少引物二聚體和非特異性產(chǎn)物；
3. 有效性：擴(kuò)增效率高，CT 值更低。
成份規(guī)格
2×Probe qPCR Mix 1ml / 5×1ml
保存條件
-20℃可保存12個(gè)月。
使用方法
使用方法
注 意：
以下舉例為常規(guī)qPCR反應(yīng)體系和反應(yīng)程序，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的改進(jìn)和優(yōu)化）
1. 根據(jù)以下表格配置反應(yīng)體系，總體積為20 μl
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試劑 |
用量 |
終濃度 |
|
2×Probe qPCR Mix |
10μl |
1× |
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正義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
|
反義引物 (10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
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探針(10μM) |
0.5μl |
0.25μM |
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模板 DNA |
x μl |
／ |
|
ddH2O |
Up to 20μl |
／ |
注 意：
1. 通常引物濃度以0.25 μM 可以得到較好結(jié)果，可以在 0.1 ~ 1.0 μM作為設(shè)定范圍的參考。
2. 使用的探針濃度，與使用的熒光定量 PCR 儀、探針種類、熒光標(biāo)記物質(zhì)種類有關(guān)，實(shí)際使用時(shí)請參照儀器說明書，或各熒光探針的具體使用要求進(jìn)行濃度的調(diào)節(jié)。
3. 通常 DNA 模板的量以 10-100 ng 基因組 DNA 或 1-10 ng cDNA 為參照，因不同物種的模板中含有的目的基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定佳的模板使用量。
2. qPCR 反應(yīng)程序，兩步法 PCR：
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過程 |
溫度 |
時(shí)間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5min |
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35－40cycles |
變性 |
95℃ |
15sec |
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退火/延伸 |
60℃ |
30sec |
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注 意：
建議采用兩步法 PCR 反應(yīng)程序，若因使用 Tm 值較低的引物等原因，得不到良好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，可嘗試進(jìn)行三步法 PCR 擴(kuò)增，退火溫度請以 55℃ - 65℃的范圍作為設(shè)定參考