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產品詳情
  • 產品名稱:免提取pcr直接擴增試劑盒

  • 產品型號: 400T
  • 產品廠商:通蔚生物
  • 產品價格:552
  • 產品庫存:125
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簡單介紹:
免提取pcr直接擴增試劑盒本產品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA,并進行PCR擴增。
詳情介紹:

產品特點
本產品專用于從各種常見的生物樣品中快速釋放DNA,并進行PCR擴增。

它具有下列特點:
1. 操作簡便,用時短,約5-10分鐘即可以得到用于核酸擴增的DNA模板,無需提取純化步驟。
2. PCR擴增試劑包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、PCR反應增強劑、優化劑以及穩定劑,濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩定性好等優點。
3.可以用于幾乎所有的生物樣品包括細-菌、昆蟲、真-菌、各種植物、各種動物、法醫樣品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛發、組織樣品、口腔細胞和FTA卡)石蠟組織切片等。
4. 在 PCR 結束后可以直接上樣電泳。
5. 不含任何有毒有害的試劑。
6. 本產品可處理 400 份樣品,進行 400 次 20μl 的 PCR 擴增。

成分規格

組成

名稱

規格

組分一

核酸釋放劑

20ml

組分二

2×PCR MasterMix

4×1ml

核酸釋放劑可常溫放置,2×PCR MasterMix 需要在-20℃保存,有效期12個月

本產品僅供科研使用 ,不得用于其它用途


使用方法
(一)DNA釋放-液體樣品
1. 將約 2 μL 液體樣品(如全血、細胞培養液、病毒樣品、糞便樣品)加入到50μL核酸釋放劑中。
注 意:總液體樣品用量不要超過本產品用量的1/10
2. 室溫放置3分鐘;對于較難裂解的樣品(如有厚壁的真-菌等),則保溫時間可以延長到 10-30分鐘。
3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行PCR擴增。

組織樣品
1. 將 2 mg 左右的固體樣品(如動物組織、植物葉片、種子等)加入到50 μL核酸釋放劑中。
注 意:總樣品量不要超過 1 mg/10μL的比例。
2. 95℃加熱 5 分鐘;對于較難裂解的樣品(如石蠟組織切片、血斑等),則保溫時間可以延長到 10-30 分鐘。
3. 簡短振蕩混勻后取樣品裂解液直接進行 PCR 擴增。

(二)PCR 擴增
注 意:以下舉例為常規PCR體系和反應條件,實際操作中應根據模板、引物結構和目的片段大小不同進行相應的調整和優化)
1. PCR體系推薦反應體系(20μl)
注 意:
裂解液體積不要超過反應體積的 1/10,對 20μL 的擴增體系,加入的裂解液不要超過2μL。引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設定范圍的參考。擴增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發生非特異性反應時,可降低引物濃度,由此優化反應體系。

試劑

用量

樣品裂解液

< 2 μl

Primer F (10μM)

0.5μl

Primer R (10μM)

0.5μl

2×PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl

2. PCR 程序

過程

溫度

時間

預變性

94℃

2min

25-35cycles

變性

94℃

30sec

退火

55-65℃

30sec

延伸

72℃

1kb/30sec

終延伸

72℃

2min


注 意:
A. 一般實驗中退火溫度比擴增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃,無法得到理想的擴增效率時,適當降低退火溫度;發生非特異性反應時,提高退火溫度,由此優化反應條件。
B. 延伸時間應根據所擴增片段大小設定,Taq DNA Polymerase 的擴增效率為1kb/30 sec。
C. 可根據擴增產物的下游應用設定循環數。如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,錯配機率會增加,非特異性背景嚴重。所以,在保證產物得率的前提下,應盡量減少循環次數
3. 結果檢測
反應結束后取5 μl反應產物,然后進行瓊脂糖凝膠電泳檢測。
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