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實驗制得細胞的樣本有哪些步驟
日期：2024-12-22 22:34
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摘要：我們在做一項實驗的時候，需要了解的步驟與所需物品有哪些？
上海通蔚生物給大家分享實驗制得細胞的樣本，您需做好下文中的這六步兩注意。所謂的六步兩注意也就是操作的六個步驟，和兩條注意事項，下面我們就來詳細的看看吧。
1、培養(yǎng)基；不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基
2、處理玻片：將多聚賴氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中），涂布于玻片上，干燥后即可使用。或者APES 2ml溶于100ml丙酮中，將玻片浸泡入內(nèi)，取出晾干，180℃干燥備用。
3、洗滌液；0.1M，pH7.2～7.4PBS
4、細胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。
5、乙醇：70% 90% *****
6、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl將其稀釋為100μg/ml
7、設備：烤箱，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，玻璃載玻片，原位雜交蓋玻片，溫箱，加樣器和吸頭等。
1、在37℃ 5% CO2條件下將細胞加在處理的載玻片上，用培養(yǎng)基培養(yǎng)，時間通過預實驗確定；
2、細胞長好后，用洗滌液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗滌；
3、室溫下用洗滌液充分洗滌固定細胞，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）
4、雜交前將固定的細胞進行如下處理；依次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二甲苯洗滌，除去殘留脂質(zhì)依次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進行再水化，每次5min，zui后浸泡于洗滌液中；
5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細胞，以增加細胞對大分子試劑的通透性，再用洗滌液洗5min；
6、用1%甲醛固定10min，用洗滌液洗凈。
1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
2、操作中尤其i重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。