ELISA是一種免疫測(cè)定。免疫測(cè)定(immunoassay, IA) 是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。在檢驗(yàn)中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。那么如何完善ELISA？
1.選擇適合您需求的ELISA方法
ELISA可以通過(guò)多種方式進(jìn)行配置，所有這些方式都涉及在封閉前將抗原固定到微孔板表面，用抗體進(jìn)行探測(cè)，并測(cè)量產(chǎn)生的信號(hào)。穩(wěn)健的洗滌技術(shù)是減少ELISA中背景信號(hào)的有效方法之一。優(yōu)化洗滌步驟的數(shù)量、持續(xù)時(shí)間和體積，以及洗滌緩沖液的去污劑濃度，對(duì)于確保去除任何可能影響結(jié)果的未結(jié)合試劑至關(guān)重要。為了獲得更一致的ELISA數(shù)據(jù)。
2.注意標(biāo)準(zhǔn)曲線
標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)于獲得定量ELISA結(jié)果至關(guān)重要，因?yàn)樗糜谟?jì)算未知樣品的濃度。出于這個(gè)原因，用于生產(chǎn)它的參考材料必須是高質(zhì)量的，并且有足夠的數(shù)量，以在分析的整個(gè)生命周期內(nèi)實(shí)現(xiàn)可重復(fù)的性能。ELISA數(shù)據(jù)通常以相對(duì)于測(cè)定讀數(shù)的分析物濃度表示，可以是比色，熒光或化學(xué)發(fā)光。在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)使用更多點(diǎn)（理想情況下為8個(gè)或更多）提供了消除異常值的靈活性，并在信號(hào)響應(yīng)范圍內(nèi)更好地定義曲線以改進(jìn)擬合。
3.確保可重復(fù)性和準(zhǔn)確性
可重復(fù)性和準(zhǔn)確性對(duì)于任何免疫測(cè)定都是必不可少的，但當(dāng)定量ELISA 數(shù)據(jù)用于推動(dòng)關(guān)鍵決策時(shí)，要求可能特別嚴(yán)格。為了額外保證檢測(cè)間的重現(xiàn)性，添加另一個(gè)內(nèi)部對(duì)照來(lái)補(bǔ)充標(biāo)準(zhǔn)曲線可提供更大的結(jié)果可信度。作為一般規(guī)則，重復(fù)讀數(shù)的變異系數(shù) (CV) 不應(yīng)超過(guò) 20%。